Bsu DNA 聚合酶

描述：该制品系专为 RNA 样本的 LAMP 扩增反应设计， 制品中 Bst 4.0+ Polymerase 中包含 Bst 2.0 DNA 聚合 酶、 极其耐热 ThermoStable V 反 转录酶、Rnase Inhibitor，在 RNA 的 LAMP 扩增中无需再加入任何其它 酶制品即可用于 RNA 的 LAMP 扩增。除此外，Bst4.0+ DNA Polymerase 聚合酶中不含有甘油成分，因此可用于 建立 LAMP 引物 mix 与酶制品的冻干品，以提高 LAMP 检测制品的稳定性和易用性。 Bst 4.0+ Polymerase 可搭配不同的反应 Buffer 从而 实现不同的显色与检测方式。三种Buffer均已包含dNTP、 Mg 2+和相应的反应缓冲盐。其中 2xRed LAMP BufferD 用于红黄变色反应，扩增完毕后阳性样品为黄色，阴性样 品为红色；2xSG LAMP BufferD 包含 SYBR Green 染料 用于实时荧光检测；2xLAMP BufferD 用于浊度分析、浊 度仪或搭配 OG 橙绿变色反应管（阳性样本为绿色、阴性 样本为橙黄色，A3821）。 货 号 名 称 A3825 Bst4.0+ Polymerase (250 μl) A3825-01 2xRed LAMP BufferD (1 ml) A3825-02 2xLAMP BufferD (1 ml) A3825-03 2xSG LAMP BufferD (1 ml) 注意：Bst4.0+ Polymerase：2.5μl 该制品包含 8U Bst2.0 DNA Polymerase、20U ThermoStable V反转录酶、8U Rnase Inhibitor、22%海藻糖，不含甘油，可用于冻干。 储存：长期保存于-20℃，可保存 2 年。短期保存置于 4℃， 保存 3 个月，避免反复冻融。 使用方法： 1. 配制反应体系 在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂 2xLAMP BufferD 10 μl Bst4.0+ Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer Mix 2 μl 模板 RNA X μl ddH2O 到总体积 20 μl 10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、 LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM 2. 反应体系配好后，置于 60~68°C（首次实验采用 65°C） 进行反应 20~45min。 3. 引物及酶制品的冻干（可参考） Bst4.0+ DNA Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer 2 µl 45%海藻糖 0.5 μl Total 5 μl 将该制品进行冻干处理，获得冻干品。 4. 冻干制品的 LAMP 扩增 向一份冻干品中加入 10 μl 的 2x Red LAMP BufferD 溶解冻 干制品，并加入最多 10 μl 的检测 RNA 模板(总体积为 20 μL) 进行 LAMP 扩增。 

Bsu DNA聚合酶是具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶，主要应用于RPA重组酶扩增。重组酶UvsX与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列；一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应，Bsu DNA聚合酶启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。 本产品为Bsu DNA 聚合酶大片段，来源于 嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus subtilis），系将Bacillus subtilis DNA 聚合酶（Bsu） I 基因的前296个AA截去而得。该酶保留了Bsu I 的 5´-3´ 聚合酶活性，但是缺失了 5´-3´ 核酸外切酶结构域，该大片段自身缺失 3´-5´ 核酸外切酶活性，可用于重组酶扩增。

组分

组分名称 数量 Bsu DNA Polymerase (Large fragment, 5 U/μl) 50 μl/500 μl 10X Bsu Reaction Buffer 1 ml/1 mlx5

应用

随机引物法标记 cDNA 第二条链的合成 单个 dA 的加尾 链置换的 DNA 合成

活性定义

在37℃条件下，30min内参入10nmol酸性不容物定义为1个活性单位。

性能测试

按照如下体系配制反应： Plasmid DNA                                    100 ng 10×Bsu Reaction Buffer                        5 μl Random9 (100μM)                               2 μl dNTP mixture(10 mM)                          2 μl Rnase free H2O                           upto 50 μl 混匀后95℃ 5min，然后冰上放置5min，分别加入不同剂量Bsu DNA聚合酶（泳道1-2：0， 泳道3-4：0.5 μl， 泳道5-6：1 μl，泳道7-8：2 μl，泳道9-10：4 μl，），分别在25℃和37℃孵育3h，电泳检测各组产物如下图

1X Bsu Reaction Buffer

50 mM NaCl ，10 mM Tris-HCl (Ph7.5) , 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT

酶储存液

50 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 20% Glycerol, pH 7.5。

储存

-20℃可保存2年，避免反复冻融。

热失活

75°C，20min。

注意事项

1、由于缺乏3 ´-5 ´核酸外切酶活性，Bsu DNA 聚合酶，大片段不能切除 3´未配对的突出末端，因而不适用于生成平齐末端。 2、25℃ 时 Bsu DNA 聚合酶，大片段 保留 50% 的活性，是同温度下 Klenow 片段（3´-5´ exo-）的两倍。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！