链霉亲和素纯化介质——一品多用，使用灵活，你get到了吗？
链霉亲和素(Streptavidin)是一种由同一亚基组成的四聚体蛋白。每个亚基与一个生物素分子结合，具有高度的亲和力和特异性。蛋白或者抗体一旦生物素化，便可以结合在链霉亲和素修饰的固相基底，如磁性材料或者是琼脂糖上，进行免疫共沉淀，结合在树脂柱或者平板表面用作ELISA。
Streptavidin Agarose Resin 6FF将链霉亲和素固定在高度交联的6%琼脂糖表面，主要用来纯化亚氨基生物素或Strep标记的蛋白、抗体、核酸等物质，或者是固定生物素化蛋白后分离其他蛋白，如免疫沉淀。
表1 Streptavidin Agarose Resin 6FF亲和介质产品特性
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参数 |
指标 |
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基质（Matrix） |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
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配体（Ligand） |
链霉亲和素 |
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粒径（Bead size） |
45-165 µm |
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载量（Capacity） |
＞200 nmol Biotin/mL介质 |
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最大压力（PressureMax） |
0.3 MPa，3 bar |
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pH稳定范围（pH range） |
2-10 |
1、直接快速分离任何生物素化分子，应用广泛，使用灵活。
2、专一性高，非特异性干扰少，结合稳定。
3、纯化树脂材质稳定。
4、结合容量高。
5、Streptavidin Agarose Resin 6FF可特异性结合多种标签，如下表所示。
表2 链霉亲和素可特异性结合的标签
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名称 |
结合能力 |
蛋白纯化洗脱条件 |
推荐应用 |
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生物素 |
强 |
强力变性缓冲液 |
固定生物素化抗体纯化抗原，或固定生物素化蛋白来分离其他蛋白，如免疫沉淀 |
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2-亚氨基生物素 |
较强 |
酸性pH=4 |
纯化带此标签的蛋白，可重复使用。 |
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可断裂的生物素化试剂 |
强 |
还原条件下 |
纯化带此标签的蛋白 |
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Strep-tag II |
弱 |
用生物素竞争洗脱 |
纯化带此标签的蛋白 |
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Twin-Strep-tag |
较弱 |
用生物素竞争洗脱 |
纯化带此标签的蛋白 |
1、平衡，使填料处于和样品一样的缓冲环境
2、上样，通过重力将样品上样至色谱柱结合
3、洗杂，除去非特异性结合的杂蛋白
4、洗脱，将结合的目的蛋白从填料上洗脱
图1 Streptavidin Agarose Resin 6FF纯化亚氨基生物素标签蛋白结果电泳图
图2 Streptavidin Agarose Resin 6FF纯化Twin-Strep-tag标签蛋白结果电泳图
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问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
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柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
清洗树脂。 |
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裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，或离心去除。 |
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样品太黏稠 |
样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5µg/ml），Mg2+(终浓度1mM)，冰上孵育10-15min |
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缓冲液太黏稠 |
有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。 |
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洗脱组分中无目的蛋白 |
过度的裂解使目的蛋白变性 |
使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。 |
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目的蛋白聚集产生沉淀 |
在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10 mM |
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目的蛋白没有完全洗脱下来 |
洗脱体积太少 |
增加洗脱液体积，减小洗脱流速。 |
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