肝小叶是肝结构和功能的基本单位，肝小叶以中央静脉为中心，肝板、肝血窦围绕中央静脉呈辐射状分布。肝脏的细胞组成主要包括肝实质细胞（即肝细胞）和非实质细胞（贮脂细胞（Ito细胞），血窦内皮细胞，Kupffer细胞，陷窝细胞，巨噬细胞等）。
人肝癌组织单细胞悬液制备
实验目的：
将肝癌样本分离，制备单细胞悬液，用于后续单细胞测序。
实验准备：
样本接收，拍照留存，超净台紫外消毒、备好冰盒冰板，准备好相应酶液。
【酶液】：
2mg/ml collagenase IV
1mg/ml collagenase I
0.02 mg/ml DNase I
30 U/ml hyaluronidase
5% FBS
0.6% bovine serum albumin (BSA)
HBSS
实验步骤：
1. 将组织倒入培养皿中，加入清洗液，摇晃清洗后弃去，共清洗三次；
2. 完全弃去清洗液后，加入配置好的酶液，使用干净的剪刀将组织完全剪碎；
3. 待组织完全剪碎后，用移液器将每组剪碎的组织移到 15ml 离心管内；
4. 将装有组织的离心管放置在 37℃摇床上消化 30min，30min 后吸上清过滤，加入新酶再消化 30min；
5. 待消化结束，将各组消化液转移至 50ml 离心管，补清洗液至 40ml，将其通过 40μm 滤器转移至新 50ml 离心管，300×g 离心 5min；
6. 弃去上清，加入红细胞裂解液 1ml 重悬裂解红细胞，裂解时间 3min；
7. 加入 10ml 清洗液终止裂解并清洗细胞，300×g 离心 5min 后清洗液重悬；
8. 加入新的清洗液，300×g离心 5min 清洗细胞两次后对悬液进行质检。
小鼠肝脏组织单细胞悬液制备
实验目的：
将小鼠肝脏样本分离，制备单细胞悬液，用于后续单细胞测序。
实验准备：
样本接收，拍照留存，超净台紫外消毒、备好冰盒冰板，准备好相应酶液。
【酶液】：
1mg/ml collagenase IV
0.5mg/ml collagenase I
0.02 mg/ml DNase I
30U/ml hyaluronidase
0.6% bovine serum albumin (BSA)
5% FBS
HBSS
实验步骤：
1. 将组织倒入培养皿中，加入清洗液，摇晃清洗后弃去，共清洗三次；
2. 加入清洗液，300×g，5min 离心清洗；
3. 弃去清洗液后，加入适量消化液，混匀消化；
4. 取20uL消化悬液进行台盼蓝染色镜检，观察细胞，免疫细胞占比较多，肝实质细胞剪碎后发现部分细胞死亡处理后占比较少；
5. 用封口膜将离心管封好，将样本放置在37oC摇床消化20min；
6. 20min后，还未消化完全，吹打混匀后继续消化5min；
7. 5min后观察消化效果，发现组织基本消化。
8. 将消化液通过100μm，40um滤网转移至50mL离心管内， 300×g 离心5min；
9. 弃去上层液体，加入2mL红细胞裂解液轻柔吹散细胞，静置3min；
10.加入清洗液至10ml终止裂红，300×g 离心5min；
11. 弃去上清，加入适量清洗液重悬混匀，分别取20ul进行AO/PI计数及台盼蓝镜检。
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部分实验结果展示
样本：人肝癌组织
细胞活率：91.2%
活细胞浓度：3.26E+05/ml
结团率：9.7%
样本：小鼠肝脏组织
细胞活率：93.16%
活细胞浓度：9.55E+05/ml
结团率：3.54%