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培养基,您选对了吗?

作者:上海逍鹏生物科技有限公司 2020-05-18T13:46 (访问量:5047)

培养基是用来供给细胞营养,促使细胞增殖的,也是细胞赖以生长的环境。细胞培养实验中用量最多的就是细胞培养基,虽然细胞培养试验基本技术大同小异,但是每种细胞的培养条件却相差甚远。若偏离某种细胞所需的培养条件,则会导致细胞表达不同的表型。

培养基种类

按照来源分类:在动物细胞体外培养实验中,可使用天然培养基(Natural Medium)或是合成培养基(Synthetic/Artificial Medium)。

天然培养基:源于动物体液或组织分离提取,营养成分丰富且各项条件与体内环境相似,所以培养效果佳,但是由于来源于动物,成分复杂,且批间差较大。

合成培养基:是由高纯度化学成分(无机盐、氨基酸、维生素、含碳物质等)与纯水配置而成,所有成分都是确定,且可知其确切含量的。

合成培养基根据实验目的又可分为三种:

★ 短时间保存细胞活性

即各类平衡盐溶液,具有特定的pH和渗透压;能维持细胞离开生物体后几小时内的活性。

★ 延长细胞存活时间

基础培养基,在平衡盐溶液中添加各种有机化合物或血清,配合适当的实验操作条件,可将细胞培养至多代。

★ 特殊功能

特殊培养基,根据实验目的-诱导分化、增殖等要求,将基础培养基额外添加各类因子的特殊培养基。

目前市面上合成培养基种类繁多且使用便利,因此合成培养基目前是使用最广泛的。

合成培养基成分与功能

培养基一般含有氨基酸、无机盐、维生素、含碳物质和其他营养元素,每种成分对于细胞存活、代谢等功能都有不同影响,不同细胞系需要的成分含量也不同,因此市面上会存在各类培养基配方。

培养基形式不同,储存体积、价格、使用方式也各不相同。

培养基的选择

培养基的选择影响着细胞培养实验的成功与否,不同细胞有着不同的特异性生长要求。

因此,我们需要通过文献阅读及实验确定细胞最适合的培养基;

大家可以参考以下表格决定自己需要使用哪种培养基。

▼ 常见细胞系推荐培养基


因培养基种类繁多,因此,我们简单列举了几种常见基础培养基为大家进行介绍

1. MEM

Minimal Essential Medium是最基本的培养基, 设计之初是为了培养HeLa细胞以及部分哺乳类的成纤维细胞。MEM含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素,适合多种细胞单层生长。以MEM为基础,Stanner利用Earle's Balanced Salts和非必需胺基酸(NEAA)进一步配制成MEM-Alpha培养基,可广泛用于哺乳动物细胞的培养。

2. DMEM

Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)是目前最常使用的改良式Eagle's培养基。DMEM与MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。主要用于快速生长的细胞,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种。DMEM含更高浓度的NaHCO3,要用10%的CO₂来平衡,当然也可以在较低CO₂浓度下使用。

DMEM-高糖(标准型)更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。

DMEM-低糖(标准型)适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。

3. RPMI-1640

RPMI-1640营养成分比较简单,比DMEM少一点糖和谷光甘肽,广泛应用于许多种正常细胞和肿瘤细胞、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。

4. DMEM:F12

F12培养基成分丰富,含有多种微量元素,和DMEM以1:1结合,称为DMEM:F12培养基,作为无血清培养基的基础,以利用了F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。

该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力,可以在DMEM:F12(1:1)中加入15mMHEPES缓冲液。

5. McCoy's 5A

McCoy's 5A Medium最早是用于肉瘤细胞的培养所设计,可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代细胞的生长。除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。

6. M-199

M-199培养基由Morgan等人研制,是第一个具有确定化学成分的细胞培养液,原本是用来研究鸡胚原代细胞。除BSS外,含有53种成分,为全面培养基,此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。主要用于鸡胚成纤维细胞培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞,广泛用于病毒学、疫苗生产。

逍鹏生物查阅了相关网站,为您整理了相关细胞所对应的BI培养基,供您参考。

如需获得完整表格文件,可以关注公众号留言噢~

Reference

  • Arora M. Cell culture media: a review[J]. Mater methods, 2013.

  • Yang Z, Xiong H R. Culture conditions and types of growth media for mammalian cells[M]//Biomedical Tissue Culture. IntechOpen, 2012.

    好啦,本期介绍就到这里了
    如果您不知道您的细胞
    适用哪种类型培养基
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